TBE बफ़र (Tris-borate-EDTA) एक बफर सॉल्यूशन है जो Tris बेस, बोरिक एसिड और EDTA (एथिलीनिडामिनेटरेटैरासिटिक एसिड) से बना है। इस बफर का उपयोग अक्सर डीएनए उत्पादों के विश्लेषण में agarose gel वैद्युतकणसंचलन के लिए किया जाता है जो PCR प्रवर्धन, डीएनए शुद्धि प्रोटोकॉल या डीएनए क्लोनिंग प्रयोगों के परिणामस्वरूप होता है।
TBE का उपयोग करता है
TBE बफर छोटे डीएनए अंशों (MW <1000) के पृथक्करण के लिए विशेष रूप से उपयोगी है, जैसे कि छोटे उत्पादों के प्रतिबंध वाले एंजाइम डाइजेस्ट। TBE में अधिक बफ़रिंग क्षमता है और यह TAE बफ़र की तुलना में तेज़ रिज़ॉल्यूशन देगा। टीएई (ट्रिस-एसीटेट-ईडीटीए) बफर ट्रिस बेस, एसिटिक एसिड और ईडीटीए से बना एक समाधान है।
टीबीई की तुलना में टीबीई आमतौर पर अधिक महंगा होता है और डीएनए लिगेज को रोकता है, जिससे बाद में डीएनए शुद्धि और बंधाव चरण का इरादा होने पर समस्या हो सकती है। अनुसरण करने वाले तीन सरल चरणों के साथ, टीबीई बफर बनाना सीखें। इसे बनाने में लगभग 30 मिनट से अधिक का समय नहीं लगना चाहिए।
जिसकी आपको जरूरत है
TBE बफर बनाने के लिए, आपको केवल चार पदार्थों की आवश्यकता होगी। इस सूची में शेष आइटम उपकरण हैं। आवश्यक चार पदार्थ EDTA डिसोडियम सॉल्ट, ट्रिस बेस, बोरिक एसिड और विआयनीकृत पानी हैं।
उपकरण के रूप में, आपको उचित रूप में पीएच मीटर और अंशांकन मानकों की आवश्यकता होगी। इसके अतिरिक्त, आप कुछ 600-मिलिलीटर और 1500-मिलिलिटर बीकर या फ्लास्क चाहते हैं। अपने उपकरणों की ज़रूरतों को पूरा करते हुए स्नातक किए गए सिलेंडर, हलचल बार और हलचल प्लेट्स हैं।
प्रयोगशाला में इन्वेंट्री की जांच करें जिसे आप शुरू करने से पहले सुनिश्चित करने के लिए उपयोग करना चाहते हैं कि आपके पास सब कुछ है। समाधान तैयार करने के बीच में रुकने से बुरा कुछ नहीं है क्योंकि आप उचित सामग्रियों से बाहर निकल चुके हैं।
यदि आपकी लैब स्कूल या आपके कार्यस्थल पर है, तो उचित कर्मियों के साथ यह देखने के लिए जांचें कि उनके पास स्टॉक में सभी आइटम हैं। ऐसा करने से आपको अंत में समय और ऊर्जा की बचत हो सकती है।
फॉर्मूला वजन को एफडब्ल्यू के रूप में संक्षिप्त किया जाता है। यह एक तत्व के परमाणु भार को एक सूत्र में प्रत्येक तत्व के परमाणुओं की संख्या से गुणा किया जाता है, फिर प्रत्येक तत्व के सभी द्रव्यमानों को एक साथ जोड़ते हैं।
EDTA का स्टॉक समाधान
समय से पहले EDTA समाधान तैयार किया जाना चाहिए। EDTA 8.0 तक समायोजित होने तक EDTA पूरी तरह से समाधान में नहीं जाएगा। 0.5 एम ईडीटीए के 500 मिलीलीटर के स्टॉक समाधान के लिए, 93.05 ग्राम ईडीटीए डिसोडियम नमक (एफडब्ल्यू = 37.22) का वजन करें। फिर इसे 400 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में भंग कर दें और NaOH (सोडियम हाइड्रॉक्साइड) के साथ पीएच को समायोजित करें। उसके बाद, समाधान को 500 मिलीलीटर की अंतिम मात्रा तक ऊपर करें।
TBE का स्टॉक समाधान
54 ग्राम ट्रिस बेस (एफडब्ल्यू = 121.14) और 27.5 का वजन करके TBE का एक केंद्रित (5x) स्टॉक समाधान करें बोरिक एसिड (एफडब्ल्यू = 61.83) का ग्राम और विआयनीकृत लगभग 900 मिलीलीटर में दोनों को भंग करना पानी। फिर 0.5 मिली (20 मिलीमीटर या एकाग्रता) EDTA (पीएच 8.0) के 20 मिलीलीटर जोड़ें और समाधान को 1 लीटर की अंतिम मात्रा में समायोजित करें। इस समाधान को कमरे के तापमान पर संग्रहित किया जा सकता है लेकिन पुराने समाधानों में एक अवक्षेप बनेगा। बफर को कांच की बोतलों में संग्रहित करें और अगर एक अवक्षेप बन गया है तो उसे त्यागें।
TBE का कार्य समाधान
Agarose जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए, TBE बफर का उपयोग 0.5x (सांद्रता के 1:10 कमजोर पड़ने) की एकाग्रता में किया जा सकता है। विआयनीकृत पानी में 10x द्वारा स्टॉक समाधान पतला। अंतिम विलेय सांद्रता 45 मिमी ट्रिस-बोरेट और 1 मिमी (मिलीमीटर) EDTA हैं। बफर अब उपयोग के लिए तैयार है एक agarose जेल चल रहा है.