फॉस्फेट-बफर सलाइन या पीबीएस समाधान

पीबीएस या फॉस्फेट बफ़र खारा है एक बफर समाधान यह विशेष रूप से मूल्यवान है क्योंकि यह मानव शरीर के तरल पदार्थों के आयन एकाग्रता, परासरण और पीएच की नकल करता है। दूसरे शब्दों में, यह मानव समाधानों के लिए आइसोटोनिक है, इसलिए यह जैविक, चिकित्सा, या जैव रासायनिक अनुसंधान में कोशिका क्षति, विषाक्तता या अवांछित वर्षा का कारण होने की संभावना कम है।

पीबीएस समाधान तैयार करने के लिए कई व्यंजनों हैं। आवश्यक समाधान में पानी, सोडियम हाइड्रोजन फॉस्फेट और है सोडियम क्लोराइड. कुछ तैयारियों में पोटेशियम क्लोराइड और पोटेशियम डाइहाइड्रोजेन फॉस्फेट होते हैं। EDTA क्लंपिंग को रोकने के लिए सेलुलर तैयारी में भी जोड़ा जा सकता है।

फॉस्फेट-बफर खारा आदर्श नहीं है समाधान में उपयोग के लिए उसमें शामिल हैं शिष्टतापूर्ण उद्धरण (फे²⁺, Zn²⁺) क्योंकि वर्षा हो सकती है। हालांकि, कुछ पीबीएस समाधानों में कैल्शियम या मैग्नीशियम होता है। इसके अलावा, ध्यान रखें कि फॉस्फेट एंजाइमी प्रतिक्रियाओं को रोक सकता है। डीएनए के साथ काम करते समय इस संभावित नुकसान के बारे में विशेष रूप से अवगत रहें। जबकि पीबीएस शारीरिक विज्ञान के लिए उत्कृष्ट है, एक पीबीएस बफर नमूना में फॉस्फेट अवगत हो सकता है अगर नमूना इथेनॉल के साथ मिलाया जाता है।

1X पीबीएस की एक विशिष्ट रासायनिक संरचना में 10 मिमी पीओएम की अंतिम एकाग्रता है₄³⁻, 137 मिमी NaCl, और 2.7 मिमी KCl। यहाँ समाधान में अभिकर्मकों की अंतिम सांद्रता है:

आपके उद्देश्य के आधार पर, आप 1X, 5X या 10X पीबीएस तैयार कर सकते हैं। बहुत से लोग बस पीबीएस बफर टैबलेट खरीदते हैं, उन्हें आसुत जल में भंग करते हैं, और आवश्यकतानुसार पीएच को समायोजित करते हैं हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ या सोडियम हाइड्रॉक्साइड. हालांकि, खरोंच से समाधान बनाना आसान है। यहाँ 1X और 10X फॉस्फेट-बफर खारा के लिए व्यंजनों हैं:

1. 800 मिलीलीटर आसुत जल में अभिकर्मक लवण को भंग करें।
2. हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच को वांछित स्तर पर समायोजित करें। आमतौर पर यह 7.4 या 7.2 है। पीएच को मापने के लिए एक पीएच मीटर का उपयोग करें, पीएच पेपर या अन्य अभेद्य तकनीक नहीं।
3. 1 लीटर की अंतिम मात्रा प्राप्त करने के लिए आसुत जल जोड़ें।

नसबंदी कुछ अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक नहीं है, लेकिन अगर आप इसे निष्फल कर रहे हैं, तो 15 साई (1.05 किग्रा / सेमी) पर 20 मिनट के लिए एलिकोट्स और आटोक्लेव में समाधान को फैलाएं।²) या फिल्टर नसबंदी का उपयोग करें।

फॉस्फेट-बफर खारा हो सकता है कमरे के तापमान पर संग्रहीत. यह प्रशीतित भी हो सकता है, लेकिन 5X और 10X समाधान हो सकता है ठंडा होने पर अवक्षेपण करें. यदि आप एक केंद्रित समाधान को ठंडा करना चाहते हैं, तो पहले इसे कमरे के तापमान पर स्टोर करें जब तक कि आप निश्चित न हों कि लवण पूरी तरह से भंग हो गया है। यदि वर्षा होती है, तो तापमान को गर्म करने से उन्हें समाधान में वापस लाया जाएगा। प्रशीतित समाधान का शेल्फ जीवन 1 महीने है।

10X एक केंद्रित या स्टॉक समाधान है, जिसे 1X या सामान्य समाधान बनाने के लिए पतला किया जा सकता है। एक 5X घोल को 5 बार पतला करना चाहिए, जबकि सामान्य पतला होना चाहिए, जबकि 10X घोल 10 बार पतला होना चाहिए।

10X पीबीएस समाधान से 1X पीबीएस के 1 लीटर काम कर समाधान तैयार करने के लिए, 10X समाधान के 100 मिलीलीटर पानी को 900 मिलीलीटर में जोड़ें। यह केवल समाधान की एकाग्रता को बदलता है, न कि अभिकर्मकों की ग्राम या दाढ़ की मात्रा। पीएच अप्रभावित होना चाहिए।

एक अन्य लोकप्रिय बफर समाधान डल्बेको का फॉस्फेट बफर खारा या डीपीबीएस है। डीपीबीएस, पीबीएस की तरह, 7.2 से 7.6 पीएच रेंज में जैविक अनुसंधान और बफ़र्स के लिए उपयोग किया जाता है। इसे कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है। Dulbecco के घोल में फॉस्फेट की कम सांद्रता होती है। यह 8.1 एमएम फॉस्फेट आयन है, जबकि नियमित पीबीएस 10 एमएम फॉस्फेट है। 1x DPBS के लिए नुस्खा है:

800 एमएल पानी में लवण घोलें। हाइड्रोक्लोरिक एसिड का उपयोग करके पीएच को 7.2 से 76 तक समायोजित करें। अंतिम मात्रा को 1000 एमएल पानी के साथ समायोजित करें। 20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव।

• डुलबेको, आर।; और अन्य। (1954). "पोलियोमाइलाइटिस वायरस के साथ पट्टिका का गठन और शुद्ध लाइनों का अलगाव". जे। खर्च। मेड। 99 (2): 167–182.
• "फॉस्फेट-बफर सलाइन (पीबीएस।" कोल्ड स्प्रिंग हार्बर प्रोटोकॉल (2006)। कोल्ड स्प्रिंग हार्ब लेबोरेट्री प्रेस।