जीन क्लोनिंग और वैक्टर

जब आनुवंशिकीविद एक जीन को क्लोन करने और आनुवंशिक रूप से संशोधित जीव बनाने के लिए डीएनए के छोटे टुकड़ों का उपयोग करते हैं ()जीएमओ), उस डीएनए को वेक्टर कहा जाता है।

आणविक क्लोनिंग में, वेक्टर एक डीएनए अणु है जो विदेशी जीन (एस) के हस्तांतरण या सम्मिलन के लिए वाहक के रूप में दूसरे सेल में कार्य करता है, जहां इसे दोहराया और / या व्यक्त किया जा सकता है। वैक्टर के बीच में हैं जीन क्लोनिंग के लिए आवश्यक उपकरण और सबसे उपयोगी है अगर वे किसी तरह के मार्कर जीन एन्कोडिंग को एक जैवविभाजक अणु को कूटबद्ध करते हैं मेजबान में उनके सम्मिलन, और अभिव्यक्ति को सुनिश्चित करने के लिए एक जैविक मूल्यांकन में मापा जा सकता है जीव।

विशेष रूप से, एक क्लोनिंग वेक्टर एक वायरस, प्लास्मिड या कोशिकाओं (उच्च जीवों के) से लिया जाता है, जिसे क्लोनिंग उद्देश्यों के लिए एक विदेशी डीएनए टुकड़ा के साथ डाला जाता है। चूंकि क्लोनिंग वेक्टर को एक जीव में स्थिर रूप से बनाए रखा जा सकता है, वेक्टर में ऐसी विशेषताएं भी होती हैं जो डीएनए के सुविधाजनक सम्मिलन या हटाने की अनुमति देती हैं। क्लोनिंग वेक्टर में क्लोन किए जाने के बाद, डीएनए के टुकड़े को एक और वेक्टर में उप-क्लोन किया जा सकता है जिसे और भी अधिक विशिष्टता के साथ उपयोग किया जा सकता है।

कुछ मामलों में, वायरस का उपयोग बैक्टीरिया को संक्रमित करने के लिए किया जाता है। इन वायरस को संक्षेप में बैक्टीरियोफेज या फेज कहा जाता है। पशु कोशिकाओं में जीन पेश करने के लिए रेट्रोवायरस बहुत बढ़िया वैक्टर हैं। प्लास्मिड, जो डीएनए के परिपत्र टुकड़े हैं, सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले वैक्टर हैं जो विदेशी डीएनए को बैक्टीरिया कोशिकाओं में पेश करने के लिए उपयोग किए जाते हैं। वे अक्सर एंटीबायोटिक प्रतिरोध जीन ले जाते हैं जिनका उपयोग प्लास्मिड डीएनए की अभिव्यक्ति के लिए परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है, एंटीबायोटिक पेट्री प्लेटों पर।

पादप कोशिकाओं में जीन स्थानांतरण सामान्यतः मिट्टी के जीवाणु का उपयोग करके किया जाता है एग्रोबैक्टीरियम टूमफेशियन्स, जो एक वेक्टर के रूप में कार्य करता है और मेजबान सेल में एक बड़े प्लास्मिड को सम्मिलित करता है। क्लोनिंग वेक्टर वाले केवल कोशिकाएं बढ़ेंगी जब एंटीबायोटिक्स मौजूद हैं।

वैक्टर के छह प्रमुख प्रकार हैं:

• प्लाज्मिड। सर्कुलर एक्स्ट्राक्रोमोसोमल डीएनए जो स्वायत्त रूप से बैक्टीरियल सेल के अंदर प्रतिकृति करता है। प्लास्मिड की आम तौर पर एक उच्च प्रतिलिपि संख्या होती है, जैसे कि pUC19 जिसकी प्रति सेल 500-700 प्रतियों की एक प्रति है।
• फेज। बैक्टीरियॉफ़ेज लैम्बडा से व्युत्पन्न रैखिक डीएनए अणु। इसके जीवन चक्र को बाधित किए बिना इसे विदेशी डीएनए से बदला जा सकता है।
• Cosmids। एक और गोलाकार एक्स्ट्राक्रोमोसोमल डीएनए अणु जो प्लास्मिड और फेज की सुविधाओं को जोड़ता है।
• बैक्टीरियल कृत्रिम गुणसूत्र। बैक्टीरियल मिनी-एफ प्लास्मिड पर आधारित है।
• खमीर कृत्रिम गुणसूत्र। यह एक कृत्रिम गुणसूत्र है जिसमें टेलोमेरस होते हैं (गुणसूत्रों के सिरों पर डिस्पोजेबल बफ़र्स जो कि विभाजन के दौरान बंद हो जाते हैं) प्रतिकृति की उत्पत्ति, एक खमीर सेंट्रोमियर (एक गुणसूत्र का एक हिस्सा जो बहन क्रोमैटिड्स या एक डायड को जोड़ता है), और खमीर में पहचान के लिए एक चयन योग्य मार्कर कोशिकाओं।
• मानव कृत्रिम गुणसूत्र। इस प्रकार का वेक्टर मानव कोशिकाओं में जीन वितरण के लिए उपयोगी है, और अभिव्यक्ति अध्ययन और मानव गुणसूत्र समारोह का निर्धारण करने के लिए एक उपकरण है। यह एक बहुत बड़े डीएनए टुकड़े को ले जा सकता है।

सभी इंजीनियर वैक्टर में प्रतिकृति (एक प्रतिकृति), एक क्लोनिंग साइट (जहां विदेशी डीएनए का सम्मिलन स्थित है) की उत्पत्ति नहीं है आवश्यक मार्करों की प्रतिकृति या निष्क्रियता को बाधित करता है, और एक चयन योग्य मार्कर (आमतौर पर एक जीन जो एक प्रतिरोध प्रदान करता है एंटीबायोटिक।)