TAE बफर ट्रिस बेस, एसिटिक एसिड और EDTA (ट्रिस-एसीटेट-ईडीटीए) से बना एक समाधान है। यह ऐतिहासिक रूप से agarose gel के लिए उपयोग किया जाने वाला सबसे आम बफर है वैद्युतकणसंचलन डीएनए उत्पादों के विश्लेषण में जिसके परिणामस्वरूप पीसीआर प्रवर्धन, डीएनए शुद्धि प्रोटोकॉल या डीएनए क्लोनिंग प्रयोगों।
इस बफर में कम आयनिक शक्ति और कम बफरिंग क्षमता होती है। यह डीएनए के बड़े (> 20 किलोबेस) टुकड़ों के वैद्युतकणसंचलन के लिए सबसे उपयुक्त है और इसे बार-बार या (4 घंटे) जेल रन समय के लिए प्रतिस्थापित करने की आवश्यकता होगी। इसे ध्यान में रखते हुए, आप बफर के कई बैच बनाने पर विचार कर सकते हैं।
यह देखते हुए कि बफर बनाना आसान है और चरणों को जल्दी से पूरा किया जा सकता है, एक समय में एक से अधिक बैच बनाना विशेष रूप से समय लेने वाली या कठिन नहीं होना चाहिए। नीचे दिए गए निर्देशों का उपयोग करते हुए, TAE को बफर बनाने के लिए सिर्फ 30 मिनट का समय चाहिए।
टीएई बफ़र के लिए आपको क्या चाहिए
चूंकि TAE बफर बनाने के लिए केवल निर्देशों का त्वरित और सरल सेट की आवश्यकता होती है, इसके लिए आवश्यक सामग्री की संख्या अत्यधिक नहीं है। आपको बस EDTA (एथिलीनमाइनेटेटैरासिटिक एसिड) डिसोडियम सॉल्ट, ट्रिस बेस और ग्लेशियल एसिटिक एसिड की आवश्यकता होगी।
बफर बनाने के लिए भी उचित रूप में पीएच मीटर और अंशांकन मानकों की आवश्यकता होती है। आपको 600 मिलीलीटर और 1500 मिलीलीटर बीकर या फ्लास्क के साथ-साथ स्नातक किए गए सिलेंडर की भी आवश्यकता होगी। अंत में, आपको विआयनीकृत पानी, हलचल पट्टियाँ और हलचल प्लेटों की आवश्यकता होगी।
निम्नलिखित निर्देशों में, सूत्र भार (प्रत्येक तत्व के परमाणु द्रव्यमान को परमाणुओं की संख्या से गुणा किया जाता है, फिर प्रत्येक के द्रव्यमान को एक साथ जोड़ा जाता है) को एफडब्ल्यू के रूप में संक्षिप्त किया जाता है।
EDTA का स्टॉक समाधान तैयार करें
EDTA समाधान समय से पहले तैयार किया जाता है। EDTA के 8.0 तक समायोजित होने तक EDTA पूरी तरह से एक समाधान में नहीं जाएगा। 500 मिलीलीटर के स्टॉक के लिए 0.5 M (molarity, या एकाग्रता) EDTA का समाधान, 93.05 ग्राम EDTA डिसोडियम नमक (FW = 372.2) का वजन करें। इसे 400 मिली लीटर विआयनीकृत पानी में घोलें और सोडियम हाइड्रॉक्साइड (NaOH) के साथ पीएच को समायोजित करें। 500 मिलीलीटर की अंतिम मात्रा के लिए समाधान ऊपर।
अपना स्टॉक समाधान बनाएं
ट्राइस बेस (एफडब्ल्यू = 121.14) के 242 ग्राम वजन और इसे लगभग 750 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में भंग करके टीएई का एक केंद्रित (50x) स्टॉक समाधान करें। ध्यान से ग्लेशियल एसिड के 57.1 मिलीलीटर और 0.5 एम EDTA (पीएच 8.0) के 100 मिलीलीटर जोड़ें।
उसके बाद, समाधान को 1 लीटर की अंतिम मात्रा में समायोजित करें। यह स्टॉक समाधान कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है। इस बफर का पीएच समायोजित नहीं किया गया है और लगभग 8.5 होना चाहिए।
TAE बफर के एक कार्य समाधान तैयार करें
1x TAE बफ़र का कार्यशील समाधान केवल स्टॉक समाधान को 50x तक विआयनीकृत पानी में पतला करके बनाया जाता है। अंतिम विलेय सांद्रता 40 मिमी (मिलीमीटर) ट्रिस-एसीटेट और 1 मिमी EDTA हैं। बफर अब एक agarose जेल चलाने में उपयोग के लिए तैयार है।
समेट रहा हु
TAE बफर के लिए उपरोक्त सभी सामग्री सुनिश्चित करने के लिए शुरू करने से पहले इन्वेंट्री की जाँच करें। आपके आपूर्ति कर्मी आपको यह बताने में सक्षम होना चाहिए कि क्या उनके पास स्टॉक में आपकी जरूरत की सभी वस्तुएं हैं। आप प्रक्रिया के बीच में कुछ याद नहीं करना चाहते हैं।