10X TBE वैद्युतकणसंचलन बफर प्रोटोकॉल या पकाने की विधि

TBE और TAE आणविक जीव विज्ञान में बफ़र्स के रूप में उपयोग किया जाता है, मुख्यतः के लिए वैद्युतकणसंचलन न्यूक्लिक एसिड की। डीएनए इलेक्ट्रोफोरेसिस के लिए, ट्राइ बफ़र्स का उपयोग कुछ बुनियादी पीएच स्थितियों के तहत किया जाता है, क्योंकि यह डीएनए रखता है घोल में घुलनशील और अपघटित होता है इसलिए यह धनात्मक इलेक्ट्रोड की ओर आकर्षित होगा और एक के माध्यम से पलायन करेगा जेल। EDTA समाधान में एक घटक है क्योंकि यह आम है कीलेटिंग एजेंट एंजाइम द्वारा न्यूक्लिक एसिड को क्षरण से बचाता है। EDTA divalent chelates cuclactors हैं जो nucleases के लिए cofactors हैं जो नमूना को दूषित कर सकते हैं। हालांकि, चूंकि मैग्नीशियम केशन डीएनए पोलीमरेज़ और प्रतिबंध एंजाइमों के लिए एक सहसंयोजक है, इसलिए EDTA की एकाग्रता जानबूझकर कम (लगभग 1 मिमी एकाग्रता) रखी जाती है।

आपको समाधान को निष्फल करने की आवश्यकता नहीं है। हालांकि समय की अवधि के बाद वर्षा हो सकती है, स्टॉक समाधान अभी भी उपयोग करने योग्य है। आप पीएच मीटर का उपयोग करके पीएच को समायोजित कर सकते हैं और केंद्रित के ड्रॉपवाइड जोड़ सकते हैं हाइड्रोक्लोरिक एसिड (HCl). कमरे के तापमान पर टीबीई बफर को स्टोर करना ठीक है, हालांकि आप कण को ​​हटाने के लिए 0.22-माइक्रोन फिल्टर के माध्यम से स्टॉक समाधान को फ़िल्टर करना चाह सकते हैं जो वर्षा को बढ़ावा देगा।

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दुर्घटना से 5X या 10X स्टॉक समाधान का उपयोग करने से आपको खराब परिणाम मिलेंगे क्योंकि उतनी ही गर्मी उत्पन्न होगी। आपको खराब रिज़ॉल्यूशन देने के अलावा, नमूना क्षतिग्रस्त हो सकता है।

यद्यपि TBE और TAE आम वैद्युतकणसंचलन बफ़र हैं, लेकिन हैं अन्य विकल्प लिथियम-बोरेट बफर और सोडियम बोरेट बफर सहित कम-दाढ़ता प्रवाहकीय समाधानों के लिए। टीबीई और टीएई के साथ समस्या यह है कि ट्रिस-आधारित बफ़र्स विद्युत क्षेत्र को सीमित करते हैं जो इलेक्ट्रोफोरेसिस में इस्तेमाल किया जा सकता है क्योंकि बहुत अधिक चार्ज एक भगोड़ा तापमान का कारण बनता है।

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